· poliacrilamidagel most per monòmer d'acrilamida, material de partida de polimerització, catalitzador i el dret de la barreja de sal i tampó junts.
· acrilamidai BIS (N, N '- metilè doble acrilamida) és la matriu de gel en forma de monòmers.
· El persulfat d'amoni inicia el procés de polimerització adhesiva.La formulació de la cola requereix una solució de persulfat d'amoni al 10% preparada en aigua.La majoria de la informació indicava la necessitat d'un ús actiu.Tanmateix, la solució al 10% es pot col·locar a 4 ℃ durant diverses setmanes sense una pèrdua significativa d'activitat.Porta fins a 10 ml i descarta quan la cola no s'agrega.
Consell: el percentatge deacrilamidaen seqüenciar cola i cola proteica no és el mateix.Si utilitzeu acrilamida prefabricada: solució BIS, assegureu-vos d'obtenir l'ampolla adequada.
· TEMED (N, N, N', N'- tetrametil etilendiamina) és un catalitzador, en una ampolla marró, col·locada a la nevera.Afegiu-hi just abans d'abocar la cola.
· Electroforesi de poliacrilamida, el vidre utilitzat en l'electroforesi s'ha de rentar abans i després de cada vegada.Després de l'electroforesi, rentar amb un raspall suau i un drap amb aigua calenta i sabó, esbandida amb aigua destil·lada i deixar assecar.
· La humitat i la pols poden causar amb polímer buit.Abans de l'electroforesi, netegeu la placa de vidre amb un netejador de vidre i netegeu-la amb un raspall suau.Rentar amb aigua destil·lada i assecar bé amb una tovallola de paper.Esbandir amb etanol al 70% abans d'eixugar amb paper ajuda a netejar i accelerar l'assecat.Afegiu mostres d'acrilamida successivament: BIS, aigua, solució tampó, persulfat d'amoni, TEMED.Agitar bé i abocar immediatament.
No és necessari desgasificar la poliacrilamida abans de la polimerització.(L'acrilamida solia col·locar-se al buit per eliminar les bombolles perquè l'oxigen inhibeix la polimerització.)
Punts de mostra de punt de cola horitzontal.
· Posa un tros de paper negre a la caixa inferior, fons negre per fer algun forat de mostra per veure-ho més clar.
· Tampó ple de dipòsit de cola, just per sobre del col·loide.
· Si la vora té llum, enceneu els llums, deixeu que la llum brilli col·loide.Traieu la mostra a la pipeta.
· Ús d'un dispositiu de pipeteig automàtic.
· En 10-200 mu es pot utilitzar 1 punt de moviment líquid en la majoria dels punts de la mostra.Per a forats de mostres molt petits (menys de 10 μ1), el capçal de pipeta llarg utilitzat per seqüenciar la cola és més convenient.
· pipetejar només immersos a la mostra, inhalant fluid que es mou lentament.La mostra pot semblar enganxosa amb la glicerina i el bombeig ràpid pot atraure bombolles d'aire al capçal de la pipeta.
· Les mostres després d'inhalar el capçal de pipeta, mouran el cap del fluid amb suavitat a la vora de la canonada o el paper de neteja xuclar el cap de líquid fora de les gotes.Aneu amb compte de no xuclar la mostra.
Col·loqueu la mostra al forat de mostra
· Dispositiu de pipeta per mantenir una mica de pressió, fer que les mostres moguin lleugerament el cap de líquid de desbordament.
· El capçal de pipeta inserit al tampó, lleugerament més alt que els forats puntuals, manté la pressió positiva.La punta de la pipeta es pot introduir en un petit forat.
· lentament i de manera constant les mostres.La punta de la pipeta es col·loca per sobre del forat de la mostra puntual i la mostra s'enfonsarà al forat.Deixeu que la mostra s'enfonsi per omplir el forat de la mostra en lloc d'empènyer-la.
· Un cop l'última gota de mostra amb el cap de líquid, el líquid es mourà a la segona pota, augmentarà lentament el moviment del líquid, sortirà del tampó
Com fer un mostreig de cola vertical?
· Forats de mostra de punt d'enganxament verticals formats entre dues peces de vidre.En cola molt fina, el capçal de la pipeta ni tan sols es pot inserir entre dues plaques de vidre.Vigileu la glicerina!Poseu el cap de pipeta sobre el forat de la mostra i la mostra s'enfonsarà al forat.
· punt de mostra abans, assegureu-vos de posar el punt vertical del forat de la mostra de gel de polipropilè acil s'esbandeix.Rentar l'acrilamida no polimeritzada i l'aigua que pot aparèixer a la part inferior del forat de la mostra.L'aigua pot fer que el forat de la mostra sigui significativament més petit.Utilitzeu una xeringa de 25 ml o 50 ml i una agulla de calibre 18.Aboqueu el tampó d'electroforesi i netegeu amb cura el forat de la mostra.
· pot ser difícil veure el forat de la mostra, però alhora, la resta és fàcil.Si hi ha excés de forats, el tampó de mostra es pot provar amb blau de bromofenol.
Hora de publicació: 31-mar-2023