· poliacrilamidaEl gel ha de ser monòmer d’acrilamida, matèria inicial de polimerització, catalitzador i dret de sal i barreja tampó junts.
· acrilamidai Bis (n, n '- metilè doble acrilamida) és la matriu de gel de forma monòmer.
· Procés de polimerització d’adhesius d’adhesió d’amoni persulfat. La formulació de la cola requereix una solució de persulfat d’amoni al 10% preparada en l’aigua. La major part de la informació indicava la necessitat d’ús actiu. Tot i això, la solució del 10% es pot situar a 4 ℃ durant diverses setmanes sense pèrdues significatives d’activitat. Realitzeu fins a 10 ml i descarteu quan la cola no s’agrega.
Consell: el percentatge deacrilamidaEn la seqüenciació de cola i cola de proteïnes no és el mateix. Si utilitzeu la solució Premade Acrilamida: BIS, assegureu -vos d’obtenir l’ampolla adequada.
· Temed (n, n, n ', n'- tetrametil etilenediaminia) és un catalitzador, en una ampolla marró, col·locada a la nevera. Afegiu -ho just abans d’abocar cola.
· L’electroforesi de poliacrilamida usada el vidre en electroforesi s’ha de rentar abans i després de cada vegada. Després de l’electroforesi, renteu -ho amb un raspall i un drap suau en aigua sabonosa calenta, esbandiu amb aigua destil·lada i poseu -vos en assecació.
· La humitat i la pols poden causar amb polímer buit. Abans de l’electroforesi, netegeu la placa de vidre amb el netejador de vidre i netegeu -lo amb un raspall suau. Renteu -ho amb aigua destil·lada i assequeu -ho bé amb un paper de paper. Esbandir amb un 70% d’etanol abans d’eixugar -se amb paper ajuda a netejar i accelerar l’assecat. Afegiu mostres d’acrilamida successivament: bis, aigua, solució tampó, persulfat d’amoni, tem. Agiteu -ho bé i aboqueu -ho immediatament.
No és necessari desgastar poliacrilamida abans de la polimerització. (L'acrilamida solia situar -se al buit per eliminar bombolles perquè l'oxigen inhibeix la polimerització.)
Consells de mostra de cola horitzontal.
· Poseu un tros de paper negre a la caixa inferior, fons negre per fer un forat de mostra per veure amb més claredat.
· Tancador de cola, tampó ple, just sobre el col·loide.
· Si la vora té llum, enceneu les llums, deixeu que la llum brilli. Dibuixa la mostra a la pipeta.
· Utilitzant dispositius automàtics de canonades.
· En 10-200 Mu 1 punt de mudança de líquid es pot utilitzar en la majoria dels punts de la mostra. Per a forats de mostra molt petits (menys de 10 μ1), el cap de pipeta llarg que s’utilitza per a la seqüenciació de cola és més convenient.
· Pipetting acabat de immers a la mostra, inhalant líquids líquids. La mostra pot semblar enganxosa amb glicerina i el bombament ràpid pot atraure bombolles d'aire al cap de pipeta.
· Les mostres després d’inhalar el cap de canonades, mouran el cap del fluid suaument a la vora de la canonada o eixugar el paper de paper xuclar el cap líquid fora de les gotes. Tingueu cura de no xuclar la mostra.
Col·loqueu la mostra al forat de la mostra
· Dispositiu de canonades per mantenir una mica de pressió, feu que les mostres es moguin lleugerament el cap de líquid desbordat.
· El cap de canalització inserit al tampó, lleugerament superior als forats puntuals, manté la pressió positiva. La punta de la pipeta es pot inserir en un forat petit.
· Lentament i constantment les mostres. La punta de la pipeta es col·loca per sobre del forat de la mostra del punt i la mostra s’enfonsarà al forat. Deixeu que la mostra s’enfonsi per omplir el forat de la mostra en lloc d’entrada.
· Un cop la darrera gota de mostra amb capçal líquid, el líquid es mourà a la segona cama, augmentarà lentament el moviment líquid, es desplaça del tampó
Com fer mostreig de cola vertical?
· Forts de mostra de punt de cola vertical formats entre dues peces de vidre. En cola molt fina, el cap de pipeta ni tan sols es pot inserir entre dues plaques de vidre. Mireu la glicerina! Poseu el cap de la pipeta sobre el forat de la mostra i la mostra s’enfonsarà al forat.
· Exemple de punts abans, assegureu -vos de posar el punt vertical del forat de la mostra de gel de polipropilè acil. Renteu l’acrilamida no polimeritzada i l’aigua que pot aparèixer a la part inferior del forat de la mostra. L’aigua pot fer que el forat de la mostra sigui significativament més petita. Utilitzeu una xeringa de 25 ml o 50ml i una agulla de calibre de 18. Aboqueu -lo al tampó d’electroforesi i feu -ho amb cura el forat de la mostra.
· Pot ser difícil veure el forat de la mostra, però al mateix temps, la resta és fàcil. Si hi ha forats excessius, el buffer de mostra es pot provar amb blau bromofenol.
Post Horari: 31-2023 de març